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植物油菜素內(nèi)酯含量檢測
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2024-06-12 | 407 次瀏覽 | 分享到:

植物的油菜素內(nèi)脂是一種甾醇類的天然化合物,在植物的花粉、種子、莖和葉等部位都有發(fā)現(xiàn)。它對(duì)植物的生長發(fā)育起著重要的調(diào)節(jié)作用,比如促進(jìn)植物生長,增加農(nóng)作物的產(chǎn)量,提供農(nóng)作物的抗病、抗旱、抗鹽、抗?jié)?、抗熱、抗寒、減少除草劑對(duì)農(nóng)作物的傷害等。在被子植物如扁豆、水稻、玉米、蕎麥、牽?;ā⑾蛉湛?、赤楊、柑橘等都存在油菜素內(nèi)酯,在花粉和未成熟的種子中含量豐富,在莖中居中,在葉和果實(shí)中含量比較低。



檢測植物中油菜素內(nèi)酯含量的方法有高效液相色譜(HPLC)法、液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法、酶聯(lián)免疫(ELISA)法。


1.高效液相色譜(HPLC)法


色譜條件的準(zhǔn)備是做好實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵,每個(gè)參數(shù)的調(diào)整都關(guān)系到最終的結(jié)果。色譜柱的選擇,流動(dòng)相的配置,柱溫和檢測波長的設(shè)置,通過紫外檢測器獲取信號(hào),并通過軟件得到色譜峰和數(shù)據(jù)。對(duì)樣品的處理要注意的,能從樣品中提取多少,每個(gè)步驟都不能忽略。不要把精力都放在檢測的過程上,因?yàn)闄z測的時(shí)候已經(jīng)是在既定的條件了,能夠改變的就是在樣品處理的時(shí)候,盡可能的獲得準(zhǔn)確的油菜素內(nèi)酯。要測定樣品的化合物含量,就會(huì)用到標(biāo)準(zhǔn)曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線是標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對(duì)應(yīng)色譜峰或峰面積的對(duì)應(yīng)關(guān)系,或是回歸方程。它反應(yīng)了濃度和色譜值的關(guān)系,在同樣的條件下,通過測定樣品的色譜值,可以還原出來濃度,也就是樣品中所含有的油菜素內(nèi)酯含量。



2.液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法


上面是HPLC的檢測方法,具有靈敏度高,分離效果好、重現(xiàn)性強(qiáng)等特點(diǎn)。但為了獲得更為準(zhǔn)確的數(shù)據(jù),就科研方面來說,是能夠用到質(zhì)譜檢測器的。質(zhì)譜檢測器,是一種基于化合物分子量的定量檢測方法。它是在液相分離的基礎(chǔ)上,進(jìn)入質(zhì)譜分析。這種方法靈敏度更高,選擇性很強(qiáng),結(jié)果更準(zhǔn)確。



3.酶聯(lián)免疫(ELISA)法


ELISA測植物體內(nèi)的油菜素內(nèi)酯,是通過雙抗體夾心法測定的。經(jīng)過純化的植物油菜素內(nèi)酯抗體包被微孔板,制作出固相抗體。向包被了單抗的微孔中依次加入植物油菜素內(nèi)酯,再和HRP標(biāo)記的植物油菜素內(nèi)酯抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色,TMB在HRP酶的作用下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色,并在酸的作用下最終轉(zhuǎn)化為黃色。顏色的變化和反應(yīng)的程度是呈線性關(guān)系的,用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度值,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可計(jì)算出樣品中植物油菜素內(nèi)酯的含量。通常以試劑盒的形式出現(xiàn)。


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