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游離氨基酸檢測方法
來源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時間: 2024-06-13 | 276 次瀏覽 | 分享到:

所謂氨基酸,就是一種含有氨基和羧基的有機(jī)化合物。游離氨基酸是什么呢,是沒有形成肽的氨基酸。如果氨基酸中的氨基和羧基結(jié)合在同一個碳原子上,那么這種氨基酸就稱為α-氨基酸。天然的游離氨基酸大多數(shù)就是這種α-氨基酸。



既然研究游離氨基酸,那么它到底有什么作用呢?游離氨基酸就是不合群的氨基酸,不能和其他氨基酸形成化學(xué)鍵。在生物體內(nèi),游離氨基酸能夠促使蛋白質(zhì)的合成。當(dāng)機(jī)體內(nèi)需要新的蛋白質(zhì)的時候,就通過吸收外來的蛋白質(zhì),在酶的作用下降解為游離氨基酸,游離氨基酸再通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞內(nèi),根據(jù)需要形成新的蛋白質(zhì)。除此之外,還能夠?yàn)榧?xì)胞提供能量,促進(jìn)肌肉生長,調(diào)節(jié)酶的活性。在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域,可以增強(qiáng)免疫力。



檢測樣品中的游離氨基酸含量,可以通過分光光度法、液質(zhì)聯(lián)用法等來進(jìn)行,這里先簡單介紹一下分光光度法,如果需要了解LCMS檢測,需要有專業(yè)的知識和技能,并結(jié)合實(shí)際情況進(jìn)行分析。


游離氨基酸的游離氨基能夠和水合茚三酮作用,產(chǎn)生藍(lán)紫色的化合物。這個產(chǎn)物的顏色深淺,跟游離氨基酸含量成正比,在分光光度計(jì)的570nm波長處可以測定其含量。因此,檢測游離氨基酸含量,用這種方法來測定是比較快捷的,但需要注意的是,在檢測之前要將樣品中的蛋白沉淀劑去除掉,以免影響到測定結(jié)果。



在檢測中需要用的試劑有:水合茚三酮溶液,乙酸-乙酸鈉緩沖液,氨基酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,0.1%抗壞血酸(現(xiàn)配現(xiàn)用),10%乙酸。


下面,就要做標(biāo)準(zhǔn)曲線了。取6個試管,1號為空,2-6管依次為0.2,0.4,0.6,0.8,1.0。用蒸餾水稀釋補(bǔ)足2.0,并分別加入3.0水合茚三酮,0.1抗壞血酸。加塞子密封,在沸水中加熱15分鐘,等拿出來后放到冷水中快速冷卻,等試管中的溶液呈現(xiàn)藍(lán)紫色的時候,用60%的乙醇定容至20ml,搖勻后在570nm波長下測定吸光度值。以吸光度值為縱坐標(biāo),以氨基氮ug為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。檢測樣品中游離氨基酸的吸光度值,可以多次幾次求取平均值,然后結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算出樣品中的游離氨基酸含量。


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