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尿嘧啶核苷酸與胞苷酸一起構(gòu)成RNA的嘧啶核苷酸部分,是UTP,CTP合成的前體物質(zhì),由乳清酸核苷-5-磷酸經(jīng)酶催化脫羧而成。它在細(xì)胞內(nèi)的作用,主要是參與核酸合成,維持細(xì)胞正常的生理代謝,調(diào)節(jié)蛋白的轉(zhuǎn)錄和基因的表達(dá)。分子式 C9H13N2O9P,分子量324.18。對紫外線有強烈吸收性能。由尿嘧啶、核糖和磷酸連接而成。常應(yīng)用于醫(yī)療和健康應(yīng)用,具有抗衰老和健康維護方面。
檢測方法,科研實驗室一般采用高效液相色譜(HPLC)或液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)。以HPLC為例,簡單的介紹一下檢測流程。
1.樣品處理
精確稱取0.2g樣品到2ml的離心管中,加入1ml的2.5%高氯酸水溶液,混合振蕩1min,低溫超聲20min,13000r/min離心20min,取上清液0.45um膜過濾,待測。
2.色譜條件
TSKgel ODS-100V的色譜柱,長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5um;柱溫25℃。VWD檢測器,259nm。流動相:0.035mol/L 磷酸二氫鈉(pH=6.8)等度洗脫,流速1ml/min,進樣量10uL。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
使用標(biāo)準(zhǔn)品,使用有機溶劑溶解,梯度稀釋至少6個點。按色譜條件,測定對應(yīng)的色譜峰。對色譜峰面積進行積分,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)的溶液,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.樣品測定和計算
將處理好的樣品上機測定色譜峰,保留時間和標(biāo)準(zhǔn)品的保留時間是一致的。對色譜峰面積進行積分,根據(jù)回歸方程,計算出樣品中尿嘧啶核苷酸(UMP)含量。