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柚子采摘于秋冬之際,是水果中的佳品。皮香肉厚,色澤鮮美,汁水飽滿,酸甜可口,風(fēng)味濃郁,芳香四溢,回味無(wú)窮啊?!侗静菥V目》記載:柚皮能消食快膈,散憤懣之氣,化痰。根據(jù)現(xiàn)代藥理學(xué)研究證明,柚子中含有多種維生素,胡蘿卜素,揮發(fā)油,糖類,蛋白質(zhì)等。其中,柚皮甙是一種有效的化學(xué)成分,具有科學(xué)研究作用。
柚皮甙是一種黃酮類化合物,來(lái)源于蕓香科植物柚,特別是葡萄柚,橘子和橙子的果皮或果肉中?;瘜W(xué)式為C27H32O14,分子量為580.53,溶于甲醇、乙醇、丙酮、醋酸、稀堿溶液和熱水,不溶于石油醚,乙醚,苯和氯仿等非極性溶劑。柚皮甙具有多種藥理活性,比如調(diào)節(jié)血脂血糖,保護(hù)神經(jīng),抗炎抗菌,抗氧化等特點(diǎn)。
檢測(cè)樣品中的柚皮甙的含量,實(shí)驗(yàn)室一般采用的是高效液相色譜(HPLC)法。
1.樣品處理
將柚子皮經(jīng)過(guò)粉碎、干燥等步驟后,提取其中的柚皮甙。根據(jù)柚皮甙的物理或化學(xué)性質(zhì),常用有機(jī)溶劑提取、超聲波提取等。提取后,還需對(duì)提取液進(jìn)行凈化處理,以去除其中的雜質(zhì)和干擾物質(zhì)。
2.色譜條件
采用常規(guī)的C18色譜柱,250mm長(zhǎng),內(nèi)徑4.6um,粒徑5um,柱溫為室溫;采用乙腈和水(25:75)或甲醇和水(30:70)為流動(dòng)相,等度洗脫,流速1ml/min(僅供參考),紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)270nm或284nm,進(jìn)樣量10uL。根據(jù)相關(guān)的文獻(xiàn)參考方法,或標(biāo)準(zhǔn)操作進(jìn)行驗(yàn)證,看結(jié)果進(jìn)行調(diào)整參數(shù)。
3.標(biāo)準(zhǔn)曲線
標(biāo)準(zhǔn)曲線是一種外標(biāo)法,是獨(dú)立于樣品的測(cè)試。它是將柚皮甙標(biāo)準(zhǔn)品使用有機(jī)溶劑進(jìn)行溶解并成倍梯度稀釋,制作出6個(gè)不同的濃度點(diǎn),確保在紫外檢測(cè)器的有效范圍內(nèi)。6個(gè)點(diǎn)的濃度標(biāo)準(zhǔn)品,依次進(jìn)樣到HPLC,依據(jù)有效的色譜條件,測(cè)出色譜峰來(lái)。這樣就知道柚皮甙的色譜峰保留時(shí)間,記錄下來(lái),在樣品測(cè)定的時(shí)候,就能找到這個(gè)峰的位置,便于對(duì)峰進(jìn)行識(shí)別,積分和含量計(jì)算。根據(jù)測(cè)出來(lái)的各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積,對(duì)應(yīng)濃度,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。
4.含量計(jì)算
樣品的測(cè)定方法和標(biāo)準(zhǔn)品相同的,有的時(shí)候?yàn)榱吮苊馍V柱被標(biāo)準(zhǔn)品污染,也可以先測(cè)樣品。將測(cè)出來(lái)樣品的色譜峰面積進(jìn)行手工或自動(dòng)積分,代入到回歸方程,是可以計(jì)算出樣品中的柚皮甙含量。