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茶氨酸含量檢測(cè)方法
來(lái)源: | 作者:上海優(yōu)選生物 | 發(fā)布時(shí)間: 2025-04-24 | 27 次瀏覽 | 分享到:
在制備茶葉的時(shí)候,我們會(huì)發(fā)現(xiàn)一種特有的氨基酸,它是游離狀態(tài)的,且呈L型的茶氨酸。它的化學(xué)式是C7H14N2O3,分子量為174.2,易溶于水,具有焦糖香味和味精的鮮爽。遇到強(qiáng)酸的時(shí)候,茶氨酸會(huì)被水解為L(zhǎng)-谷氨酸和乙胺,茚三酮反應(yīng)呈紫色。茶氨酸有很多的藥理功能,比如鎮(zhèn)靜,減肥,降血脂,抗疲勞,抗衰老,增強(qiáng)記憶,提高免疫力等。茶氨酸約占茶葉氨基酸總量50%~60%,化學(xué)名稱為N-乙基-L-谷氨酰胺。

在制備茶葉的時(shí)候,我們會(huì)發(fā)現(xiàn)一種特有的氨基酸,它是游離狀態(tài)的,且呈L型的茶氨酸。它的化學(xué)式是C7H14N2O3,分子量為174.2,易溶于水,具有焦糖香味和味精的鮮爽。遇到強(qiáng)酸的時(shí)候,茶氨酸會(huì)被水解為L(zhǎng)-谷氨酸和乙胺,茚三酮反應(yīng)呈紫色。茶氨酸有很多的藥理功能,比如鎮(zhèn)靜,減肥,降血脂,抗疲勞,抗衰老,增強(qiáng)記憶,提高免疫力等。茶氨酸約占茶葉氨基酸總量50%~60%,化學(xué)名稱為N-乙基-L-谷氨酰胺。



實(shí)驗(yàn)室常用的檢測(cè)方法有,紫外分光光度法,高效液相色譜(HPLC)法,液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)法等。以HPLC為例,介紹一下檢測(cè)流程。


1.樣品前處理


將茶葉樣品研磨成碎末,準(zhǔn)確稱量0.5g,加入100ml的純凈水,這可不是泡茶。在80℃的水浴上搖床,搖呀搖,浸提45min。拿出來(lái),冷卻后就要進(jìn)行離心,0.45um膜過(guò)濾,待測(cè)。



2.色譜條件


C18的色譜柱,250mm長(zhǎng),4.6mm內(nèi)徑,5um的粒徑;柱溫35-40℃。用乙腈和水梯度洗脫,也可以選擇其他有機(jī)溶劑配比,流速1ml/min。紫外檢測(cè)器,波長(zhǎng)210nm或335nm,進(jìn)樣量10-20uL。根據(jù)實(shí)際環(huán)境進(jìn)行調(diào)整,確保比較好的出峰效果。



3.標(biāo)準(zhǔn)曲線


稱取少量茶氨酸(一般用L-茶氨酸)標(biāo)準(zhǔn)品,用純凈水或有機(jī)溶劑溶解并稀釋至0.01 mg/mL, 0.02 mg/mL, 0.5 mg/mL, 0.1 mg/mL, 0.15 mg/mL, 0.2 mg/mL。依次進(jìn)樣到HPLC中,以上述的色譜條件,測(cè)出對(duì)應(yīng)的色譜峰,峰面積進(jìn)行積分。對(duì)應(yīng)各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液,繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程。


4.樣品測(cè)定和計(jì)算


將樣品溶液進(jìn)樣到HPLC中,和標(biāo)準(zhǔn)品相同的色譜條件,記錄出峰的情況。根據(jù)保留時(shí)間識(shí)別目標(biāo)化合物的峰位置,對(duì)峰面積進(jìn)行積分,代入到回歸方程,就可以計(jì)算出樣品中的茶氨酸含量。另外,有的還需要計(jì)算檢測(cè)限,相關(guān)系數(shù),線性范圍,回收率,重復(fù)性等。


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